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Microscopía óptica

Ubicación i contacto

El técnico responsable  es  Ferran Hierro, los equipos se encuentran situados en el "Laboratori de microscopía D0" en la planta baja dels SCT.

Técnica

La microscopía óptica nos permite conocer la microestructura de muestras biológicas e inorgánicas mediante la interacción con un haz de luz (fotones).
Los aumentos en MO vienen dados por el producto del la magnificación de los oculares con la de las lentes-objetivos.
Para ver las imágenes de esta interacción se hace uso de los microscopios ópticos
El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:

  • El sistema mecánico está constituido por una serie de piezas en las que instaladas las lentes, que permiten el movimiento para el enfoque. Y una pletina donde se coloca la muestra.
  • El sistema óptico comprende un conjunto de lentes, dispuestas de tal manera que producen el aumento de las imágenes que se observan a través de ellas.
  • El sistema de iluminación comprende las partes del microscopio que reflejan, transmiten y regulan la cantidad de luz necesaria para efectuar la observación a través del microscopio. Cuando hacemos uso de la luz incidente o reflejada de forma directa se trabaja en MO de Campo Claro.

El método de visualización de Campo Oscuro utiliza un haz enfocado de luz muy intensa en forma de un cono hueco concentrado sobre el espécimen. El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol que se cuela en una habitación cerrada. Por ello las porciones transparentes del espécimen quedan oscuras, mientras que las superficies y partículas se ven brillantes, por la luz que reciben y dispersan en todas las direcciones. Esta forma de iluminación se utiliza para analizar elementos biológicos transparentes y sin pigmento, invisibles con iluminación normal. También es muy utilizado en la observación de muestras metalogràficas (metá licas o no) para la observación de detalles en superficies con alta reflectancia
El sistema de visualización de Contraste de Fases permite observar células sin "colorear" y resulta especialmente útil para células vivas. Este aprovecha las pequeñas diferencias de los índices de refracción en las diferentes partes de una célula y en diferentes partes de una muestra de tejido. La luz que pasa por regiones de mayor índice de refracción experimenta una deflexión y queda fuera de fase con respecto al haz principal de ondas de luz que pasaron la muestra. Además junta otras longitudes de onda fuera de fase por medio de una serie de anillos ópticos del objetivo y del condensador, y entonces anula la amplitud de la porción fuera de fase inicial del haz de luz y produce un contraste de utilidad para la obtención de la imagen. Las partes oscuras de la imagen corresponden a las porciones densas del espécimen, las partes claras de la imagen corresponden a porciones menos densas. Por lo tanto estos microscopios se utilizan para observar células vivas, cultivos celulares, plancton marino y de aguas dulces, tejidos vivos y cortes semifinos no coloreados. Dos modificaciones del microscopio de fase son el microscopio de interferencia y el microscopio de interferencia diferencial.
Los microscopios de luz polarizada son microscopios a los que se les han añadido dos polarizadores (uno entre el condensador y la muestra y el otro entre la muestra y el observador), el material es un cristal de cuarzo y un cristal de Nicol dejando pasar únicamente la luz que vibra en un único plano (luz polarizada). Algunos compuestos inorgánicos responden al efecto de la luz, éstos tienen un alto grado de orientación cristalina (sustancias anisótropos),  que hace que la luz que lo atraviesa pueda hacerlo en determinados planes vibratorios atómicos. El prisma de Nicol permite el paso de luz en un solo plano, así el cuarzo gira la posición de polarización, facilitando la identificación de sustancias que extinguen la luz. Al fenómeno de extinción de luz causado por estos planes atómicos y orientaciones moleculares se llama birrefringencia. Este tipo de microscopio se usa para poder identificar mejor sustancias cristalinas o fibrosas (como el citoesqueleto), sustancia amiloide, asbesto, colágeno, cristales de uratos, queratina, sílice, y otras de origen exógeno. Y en materiales metálicos e inorgánicos diferentes direcciones de cristalización.

Si cambiamos el espectro de luz visible para el rango del infrarrojo o ultravioleta haremos uso de los microscopios de IR o Fluorescéncia.

Equipos

En los SCT disponemos de un microscópio óptico mixto:transmisión-reflexión, campo claro y campo oscuro y con luz polarizada en modo de transmisión y un sistema de adquisición de imágenes digital. Es un Olympus BX60.

Olympus

También disponemos de un microscópio óptico invertido (preparado para observar cultiuvos celulares, plancton, mostras de aguas...) en camp claro y con contraste de interferencia, y un sistema de adquisición digital. És un Zeiss Axiovert 100 .

ZEISS